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      Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測玉米胚芽粕中

      來源:大昌洋行(上海)有限公司(大昌華嘉科學(xué)儀器部)      分類:應(yīng)用方案 2021-04-02 17:51:55 634閱讀次數(shù)
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      Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測玉米胚芽粕中氨基酸

                                                    6.png

      一、樣品前處理

      1、              所用試劑

      必須使用重蒸餾水或與之等質(zhì)的水(電導(dǎo)率<10μs)

      1、1            雙氧水,30%

      1、2            甲酸,98-100%

      1、3            苯酚:須重蒸

      1、4            偏重亞硫酸鈉

      1、5            氫氧化鈉

      1、6            鹽酸,ρ=1.18g/ml

      1、7            水解劑:6mol/l 的HCL,1L含1g苯酚:

      加1g苯酚(3.3)到492mL鹽酸(3.7)中,然后用水定容至1L

      1、8            20種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

      行號

      氨基酸

      行號

      氨基酸

      1

      CYS-OX

      磺基丙氨酸

      2

      TAU

      ?;撬?/p>

      3

      MET-SO2      

      蛋氨酸砜

      4

      ASP

      天冬氨酸

      5

      THR

      蘇氨酸

      6

      SER      

      絲氨酸

      7

      GLU

      谷氨酸

      8

      PRO      

      脯氨酸

      9

      GLY

      甘氨酸

      10

      ALA       

      丙氨酸

      11

      VAL       

      纈氨酸

      12

      MET

      蛋氨酸

      13

      ILE        

      異亮氨酸

      14

      LEU

      亮氨酸

      15

      NLE       

      正亮氨酸

      16

      TYR

      酪氨酸

      17

      PHE       

      苯丙氨酸

      18

      HIS

      組氨酸

      19

      LYS

      賴氨酸

      20

      ARG

      精氨酸

       

      2、              標(biāo)樣配置

         氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液:稱取上述各氨基酸標(biāo)樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲備液備用。

        取氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)液。

      3、              前處理設(shè)備

      1)        天平

      2)        水解管

      3)        量筒

      4)        無油真空泵

      5)        干浴水解、濃縮儀

      6)        移液管

      7)        0.45um濾膜

      4、                 樣品制備(參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC )

      1、              樣品的準(zhǔn)備

      粉碎樣品,通過0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油(3.12)脫脂。

      2、              氧化

      從準(zhǔn)備好的樣品中稱取約0.1~1克樣品,準(zhǔn)確到0.2mg,于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中,稱取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮,水分不能超過100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃,加5ml氧化試劑(過甲酸苯酚),用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小時。之后,從冰箱中取出,加0.84克偏重亞硫酸鈉(3.4)來分解過量的氧化試劑。

      3、              水解

       加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中,溫度控制在110攝氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水解1小時。然后快速旋緊瓶塞(戴手套和護(hù)眼罩)將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時。

      4、              加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

          當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)瓶從烘箱中取出,并且打開瓶口(戴手套和護(hù)目鏡)。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實(shí)驗(yàn)燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。

      轉(zhuǎn)移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測定或者放入冰箱等到分析的時候測定。

      二、分析方法描述(Biochrom 30+)

      氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

      1)        色譜柱:Biochrom Na型陽離子交換樹脂柱,4.6′20cm

      2)        分離程序:

      NO.

      Time

      Temp

      Buffer

      Pump

      Nin

      Rec

      Commands

      1

      01:00

      53

      3

      35.0ml/h

      ON

      OFF


      2

      00:00

      53

      3

      35.0ml/h

      ON

      OFF

      Reset

      3

      03:30

      53

      3

      35.0ml/h

      ON

      OFF

      Load

      4

      15:45

      53

      1

      35.0ml/h

      ON

      ON


      5

      12:00

      58

      2

      35.0ml/h

      ON

      ON


      6

      02:00

      58

      4

      35.0ml/h

      ON

      ON


      7

      26:00

      92

      4

      35.0ml/h

      ON

      ON


      8

      04:00

      92

      6

      35.0ml/h

      ON

      ON


      9

      04:00

      92

      3

      35.0ml/h

      ON

      ON


      10

      14:00

      53

      3

      40.0ml/h

      OFF

      OFF


      11

      02:45

      53

      3

      35.0ml/h

      ON

      OFF


      End








       

      3)        運(yùn)行時間:分析時間65min

      4)        反應(yīng)單元溫度:135°C。

      5)        檢測波長:570nm、440nm同時檢測。

      三、外標(biāo)法定量

      附、玉米胚芽粕分析圖譜

      3.png

      4.png

      5.png

       


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